收藏本站
我的资料
我的订单
  购物车 (0)  
亲,您的购物车空空的哟~
去购物车结算
   
查看手机网站

普博斯生物商城
电话/微信:13651002353


产品详情
鼠尾胶原标准品 
收藏
|
编号 : c0803
规格 : 10mg
品牌 : 国产
商城价格 :
360.00
市场价 : 0.0
购买数量 :
加入购物车  立即购买
产品详情
产品评论(0)

产品名称:鼠尾胶原蛋白   英文名称:Collagen from rat tail

产品规格:10MG   价格:议价

产品描述

胶原蛋白(Collagen)是结缔组织和内脏器官外基质的主要成分,但在皮肤、肌腱、骨骼中分布最为广泛。胶原蛋白在结构和遗传学上被分为不同类型,I型胶原蛋白(Collagen, Type I)结构上是由2个α1链和1个α2链组成的异源多聚体,在37℃中性条件下可形成3股螺旋结构,被广泛用于多种细胞的培养基质,如肝细胞、纤维细胞、脊髓神经节、雪旺氏细胞等。另外,I型胶原蛋白在细胞生长、分化、迁移和组织形态的发生等方面也具有重要应用。


提供的鼠尾肌腱胶原蛋白I(rat tail tendon collagen type I)根据Birkedal-Hansen方法,经过醋酸(HAc)抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备所得,可用于制备三维胶,模拟细胞真实的生长环境;也可以用于包被组织培养皿表面,提高细胞表面粘附性,比如培养角质形成细胞、肝细胞等原代细胞。


本品溶于6mM HAc溶液,浓度为5mg/ml,无菌,经严格质控测定,可成功制备三维胶或包被基质以促进细胞生长。

运输和保存方法

冰袋运输。4℃保存,有效期1年。不可冻存。

注意事项


1、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


2、整个操作请于冰上进行,因室温下鼠尾胶原I可迅速成胶。


3、整个操作请在无菌环境下无菌操作,避免污染以影响细胞生长。

使用说明

1、薄层包被(Thin coating)的制备

注意:组织培养器皿的推荐包被浓度为1-5µg/cm2,起始浓度可首选5µg/cm2。建议根据具体的细胞培养系统进行优化。

1.1 HAc稀释液的制备

本品以溶于6mM HAc的溶液形式提供,本身不溶于中性pH,因可用6mM HAc溶液做进一步稀释。

配置方法:取34.5µl 冰醋酸(17.4M)加入100ml细胞培养级双蒸水,混匀后即得到6mM HAc溶液,0.22µm滤膜过滤除菌后待用。

1.2 包被步骤

a、根据设计的实验体系,计算最终包被浓度下需要的I型胶原总量;

b、用6mM醋酸溶液将胶原I(5mg/ml)稀释到合适的中间浓度,比如当包被浓度为5µg/cm2,可将胶原稀释到50µg/ml,对于35mm培养皿(表面积为9 m2),加入900µl 50µg/ml胶原溶液即可;比如当包被浓度为2µg/cm2,可将胶原稀释到12µg/ml,对于35mm培养皿(表面积为9 cm2),加入1.5ml 20µg/ml胶原溶液即可;一定要确保胶原溶液完全覆盖表面。可参考附表1 不同培养皿下加入胶原体积对应表。

c、室温孵育1h,小心吸去多余的液体。用无菌PBS或无血清培养基清洗3-4次后直接使用。或者加完胶原溶液后,开盖后在超净台内过夜晾干。

:包被好的器皿在4-8℃,无菌条件下至少可保存3个月以上的时间。


2、三维胶原的制备


【注意】:建议制备三维胶原模型,成胶浓度控制在1~2mg/ml之间。因本品以溶于6mM醋酸的溶液形式提供,需要先用0.1M NaOH中和 pH值,才能促使成胶实现。


注意:请在实验前,将所有需要试剂和耗材:10×PBS或10×培养液,0.1M NaOH,双蒸水,以及离心管,枪头置于冰上遇冷,所有溶液和耗材都要无菌。

2.1.三维胶原(无细胞)的制备(以配制1ml,1mg/ml三维胶为例)

a、取200µl鼠尾胶原蛋白I型 (5mg/ml)加到提前冰浴的离心管内,加入688µl无菌水。之后加到12µl 0.1M NaOH(注意:该步骤顺序不能反,如果反过来把12µl 0.1M NaOH加到胶原溶液中,会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即混匀。再加入100µl 10×PBS(初次使用建议选择含酚红)或10×培养液,混匀后立即加到培养器皿中,混匀后得到的pH为7.0左右。

b、将培养器皿在室温(25℃左右)下放置20min待胶凝固后,转移到培养箱内。【注】:如果配制中使用的10×PBS,需要在做细胞培养前,先加入适当体积的细胞培养液预平衡。

2.2.三维胶原(含细胞)的制备(以配制1ml,1mg/ml三维胶为例)

a、准备好细胞悬液,并放置于冰浴中。

b、将200µl鼠尾胶原蛋白I型 (5mg/ml)加到0.1M NaOH(注意:该步骤顺序不能反,如果反过来把12µl 0.1M NaOH加到胶原溶液中,会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即混匀。再加入23µl 10×PBS(初次使用建议选择含酚红)混匀或者10×培养液,混匀(pH为7.0左右)。再加入760ul的细胞悬浮液,混匀后立即加到培养器皿中。

c、将培养器皿在室温(25℃左右)放置20min待胶凝固后,加入适当体积的细胞培养液,转移到培养箱中培养。

常规细胞培养板培养面积

Culture vesselSurf. area per well

包被浓度:2µg/cm2,中间稀释浓:12µg/ml,加入的胶原溶液体积

包被浓度:5µg/cm2,中间稀释浓度:50µg/ml,加入的胶原溶液体积

96-well0.3 cm250µl30µl
24-well2 cm2333µl200µl
12-well4 cm2666µl400µl
6-well9 cm21500µl900µl
35-mm9 cm21500µl900µl
60-mm21 cm23500µl2100µl
100-mm55 cm29166µl5500µl

注意事项:鼠尾胶原蛋白I型在室温下pH中性时可迅速成胶,在操作过程中要尽量保持低温。

备注:此产品仅限用于科研试验


产品使用说明
      
  • 请注意:所有产品仅供研究使用,不能用于诊断和治疗用途,非药品或者其他用途,不要使用在人类;产品附正规发票;产品信息仅供参考,具体以实物为准。 
      
  • 琼脂打孔器回馈新老客户,全面降价优惠,50-80元不等,大量现货;可以订制各种规格琼脂打孔器。 
会员登录
登录
我的资料
我的收藏
购物车
0
留言
回到顶部